玉米内源蛋白相互作用对重组抗体恢复的影响

在4%多聚甲醛和0.5%戊二醛中固定表达2G12的转基因玉米种子，该转基因玉米种子携带一个信号肽，该信号肽可将抗体链引导到膜系统中，但没有进一步的靶向信号。发育中的转基因种子小片(约1毫米)^3.)，如前所述作进一步处理[13]．经乙醇系列脱水后，将样品浸润并包埋在LRWhite树脂中，在60℃下进行2天的聚合。用Leica Ultracut UCT获得半薄切片(1µm)，用甲苯胺蓝染色或用于免疫荧光研究。制备超薄切片(80 nm)，用1%醋酸铀酰和3%柠檬酸铅染色徕卡EM AC20重组2G12抗体免疫金定位后。用a徕卡DM5500．用FEI Tecnai G观察超薄切片²电子显微镜。

研究了2G12抗体在玉米胚乳中的沉积。玉米胚乳细胞的特征是存在丰富的球形淀粉粒，均匀分布在细胞质内的小球形玉米蛋白体和几个蛋白质储存液泡(PSV)(图1A)。抗体链定位在这些psv中(图1B)，正如预期的那样，在没有进一步靶向信息的情况下，蛋白质进入了谷物种子的膜系统(14、15)．出乎意料的是，在玉米蛋白体内也可以检测到强烈的信号，这与在玉米中表达的其他分泌性重组蛋白的报道相反[15]．

电子显微镜证实了这种沉积，并且显示一些玉米蛋白体已经失去了典型的球形外观和玉米蛋白与蛋白体的正态分布(图2)[10]描述玉米蛋白体为球形结构，具有低电子密度的α-和δ-玉米蛋白核心和外围薄的高电子密度的γ-玉米蛋白层。这种结构是保守的，并且已经证明所有玉米蛋白亚家族的存在和平衡的相互作用对于稳定玉米蛋白体和形成典型的球形结构是必要的[16,17,18]．在我们的样品中，很大一部分抗体只能在还原条件下提取，这表明抗体链和γ-玉米蛋白之间形成了二硫化物桥[19]．这种相互作用也得到了一个事实的支持，即无定形玉米蛋白体的流行取决于2G12的表达量，这表明玉米蛋白抗体低聚物的存在是玉米蛋白体中观察到的畸形的原因[19]．虽然在某些情况下，重组药物与内源性蛋白的相互作用是为了口服给药，但在其他情况下，如本例，它们会影响可溶性蛋白的产量。我们认为，减少与内源储存蛋白的相互作用应该是提高玉米可溶性重组抗体产量的有效策略。

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