在体内定位骨干细胞

形成骨骼的结构在胚胎发育的早期就出现了，在儿童时期继续生长，并在我们的一生中积极重塑。间充质干细胞(MSCs)起源于胚胎中胚层，并在全身形成结缔组织。这些细胞的谱系限制衍生物在出生后的生长过程中持续存在，并在我们一生的结缔组织的维护和修复中发挥作用。由于缺乏足够特异性的分子标记，无法在原位识别这些细胞，所以这些间充质干细胞是否能在产后作为真正的多功能“干细胞”存在尚未解决。有必要更好地了解这些间充质干细胞是如何发育成成骨细胞的，以及它们在微环境中如何与其他细胞(包括骨吸收破骨细胞、造血细胞和血管细胞)相互作用。这些相互作用，以及来自系统内分泌刺激的输入，协同调节骨骼完整性。MSC成熟和信号通路的紊乱可导致各种结构性和代谢性骨疾病，如骨质疏松症，并可导致骨折。更多地了解MSC生物学及其在骨微环境中的作用，可能转化为预防或纠正骨病的新策略。

用于研究肌肉骨骼组织的常见组织学方法是费力的，可能需要数周的时间来固定、脱钙、切片、染色和成像标本。为了实现对骨标本中各种分子信号的高效和高通量分析，需要改进组织学技术，将多种分子信号与特定细胞相关联。制备矿化、未钙化小鼠骨切片的快速冷冻组织学方法的结果[1]然后是快速高对比度的雷成像的部分显示在本文中。

当对未钙化的骨骼样本进行成像时，一种能够快速成像并实现清晰、高对比度的3D成像的解决方案是最实用的，重要的细节可以清晰地分辨出来。传统的广角显微镜速度快，检测灵敏度高，但不幸的是，厚标本的图像经常显示失焦模糊或雾霾，这降低了对比度[２]．

未钙化骨切片来自表达LepRCre x rosa26mt /mG小鼠绿色荧光蛋白和tdTomato[3]根据Dyment等人的方案制备标记骨祖细胞MSC。[1]用Hoechst 33342染色，以确定DNA。采用25× / 0.95 NA(数值孔径)物镜的THUNDER成像仪组织获得了38 μm z -叠加图像。即时计算清除(ICC)[２]应用于图像堆栈，然后进行最大强度投影。

与传统的广角显微镜成像相比，THUNDER技术通过去除失焦光，使未钙化骨的更多细节可视化。

迅雷技术即时计算清除(ICC)[２]与传统的广角显微镜相比，当成像未钙化的小鼠骨骼时，显著增强了对比度，允许更多的细节快速分辨。它可能帮助研究人员对骨骼细胞间信号有更多的了解。