EMA-qPCR检测水样中弯曲杆菌细胞活力的影响因素及适用性

近年来，因水污染引起的人体弯曲菌病病例报道越来越多。由于基于培养的弯曲杆菌检测费时且可能产生假阴性结果，因此研究了实时荧光定量PCR方法结合单叠氮化钠样品预处理(EMA-qPCR)快速定量检测水样中活弯曲杆菌的适用性。EMA-qPCR是一种快速检测食品样品中活弯曲杆菌的有效方法。应用膜过滤和离心这两种常用的从水中分离细菌的方法，发现平均损失高达1.08 log₁₀细胞/ml从添加的样品。荧光显微镜显示，单独使用这两种方法会导致样品中死亡细菌的丢失和活细菌的积累。样品过滤后，在后续的qPCR实验中，EMA和EMA前处理与基于培养计数相比，均未发现显著差异。高的相关性(R²= 0.942无EMA, R²=0.893, EMA)。样品离心后，qPCR结果高估了弯曲杆菌的数量，而EMA-qPCR和参考方法的结果具有可比性。在池塘水中检出的活细胞高达81.59%，EMA-qPCR检测不到正确数量的活细胞。然而，对被添加的自来水样品的分析显示出高度的相关性(R²= 0.863)。膜过滤后，EMA-qPCR成功应用于弯曲杆菌田间分离株，结果表明，通过分析确定的活细胞和非活细胞混合物，EMA-qPCR优于qPCR。综上所示，EMA-qPCR是检测水样中可行弯曲菌的一种有效方法，但分离技术和水样类型/质量影响检测结果。