清除后整个器官的高分辨率三维成像

斑马鱼睾丸已成为硬骨鱼类和其他脊椎动物生殖生物学的有力模型，并在应用和基础研究中有多种应用。许多研究都集中在二维图像上，这很耗时，并且意味着结果的外推。整个器官的三维成像最近成为一个重要的挑战，以更好地了解其结构，并允许细胞计数。因此，已经制定了一些协议来提高样本透明度，这是对大型生物样本成像的一个限制步骤。然而，这些方法都没有应用于斑马鱼睾丸。我们测试了五种清除方案，以确定其中一些方案是否只需对睾丸进行少量修改即可应用。我们在宏观和微观水平上比较了清除效率。CUBIC和PACT适用于有效的透明度、最佳的光学穿透力和绿色荧光蛋白荧光保护和避免有意义的组织变形。最后，我们成功地用CUBIC和PACT以细胞分辨率捕获了整个睾丸的3D图像，这在研究睾丸的3D结构及其细胞内容的标准工作流程中是很有价值的。这为包括发育、遗传学或毒理学在内的多个领域的高含量表型研究的进一步发展铺平了道路。