编程序列
在该制备过程中使用两根电子枪，两者都需要脱气，以避免由于在实际蒸发开始时由于加热而对真空的相当大的降解。代替Pt / C和C的两个随后的脱涂/泵/蒸发循环，优选首先脱枪，然后泵泵以达到蒸发两种材料所需的良好工艺真空。这里正在描述实现这种方法的自动化序列。PT / C枪安装在右侧，左侧的C枪。
材料
- 使用PT标准设置，50W脱气功率和120次脱气定义了材料“铂脱胶”。
- 使用C标准设置，75W脱气功率和300次脱气定义材料“碳脱甜”。
- “铂不脱气”和“碳不脱气”这两种材料被定义为与原材料性质相同，但脱气失活。
流程
- “铂/C脱气”的工艺设计仅用于铂/C枪的脱气，程序使用的材料是“铂脱气”。这个过程被设置为1.0 × 10-4MBAR，具有低30 W的蒸发功率，并且在打开快门后立即终止目标厚度为0.0nm。因此，设置舞台位置已过时。
- “脱气C”工艺的设计，只脱气C枪使用的材料“碳脱气”。这个过程被设置为1.0 × 10-4MBAR，具有低30 W的蒸发功率，并且在打开快门后立即终止目标厚度为0.0nm。因此，设置舞台位置已过时。
- “阴影Pt/C”工艺程序采用以下设置:材料“铂无脱气”，100 W靶功率，2.0 nm靶厚度，真空< 2.5 × 10-5Mbar，阶段倾斜-54°(相对于炮5°)，最大工作距离，旋转5(最大)。
- 采用“碳无脱气”材料、120 W靶功率、6.0 nm靶厚、真空< 2.5 × 10设定“背衬C”工艺-5MBAR，20°倾斜（相对于水平），最大工作距离和旋转5（最大）。
序列
- 制备由“脱气Pt / c”，“脱气C”，“阴影Pt / C”和“背衬C”组成的序列。
准备
在实验之前，Pt / C和C枪都被彻底清洁，靶标和细丝按照手册建立。PT / C枪安装在真空室的右侧，左侧的C枪。该仪器设置在横向位置的Lars（低角度旋转阴影）阶段和石英晶体。
在喷涂缓冲液（100mmol / L乙酸铵，30％甘油，pH7.6）中，将具有1,010个碱基堆叠（对应于343nm）的130μg/ ml dsdna稀释1:20。如上所述用喷涂装置喷涂小液滴［1］在云母碎片的新切割的表面上尺寸约为2×2毫米，并在50 mm圆形滤纸上安装双面粘带。
喷洒后，滤纸上的样品立即转移到现成的样品上徕卡EM ACE600.并疏散。执行如上概述的序列，在完成后自动排出腔室。
从真空室中取出滤纸上的复制品，并转移到湿式Cham-BER，由塑料盘制成，parafilm（以使样品弄湿）和湿滤纸。为了便于脱离复制品，将它们在45℃下在烘箱中孵育30分钟。
随后，在白色盘子的蒸馏水表面上漂浮，用未拍摄的400目Cu栅格拾取，用DDH转移到另一个菜肴上2用于除去所有残留的有机材料（甘油）并用另一个栅格拾取。从侧面和用滤纸的钳子的尖端呈涂衬里过量的水，空气干燥样品。
在80千伏的透射电子显微镜下观察了空气干燥的副本，如前所述，通过在干燥液滴中心形成的残余盐晶体可以确定感兴趣的区域［1］。用a记录图像CCD相机在像素大小为0.373nm /像素。
致谢
作者谢谢卡雷尔丽皮集团在维也纳格雷戈尔门尔研究所，为校园科学支援设施GmbH的电子显微镜设施提供了样品和团队（www.csf.ac.at em），维也纳为他们的帮助。
参考
- Aebi U.和Baschong W：甘油喷涂/低角度旋转金属阴影，IN：Celis JE（ED。）：细胞生物学 - 一个实验室手册，第三版，3：241-46（2006）。
