烦恼SE是一种主要用于分析蛋白质相互作用或蛋白质构象变化的方法。有几个先决条件烦恼发生:
- 给体和受体的距离必须小于10 nm
- 激发光谱和发射光谱必须充分分离
- 供体的发射光谱必须与受体的吸收光谱重叠
由于施主发射光谱和受主吸收光谱之间的必然重叠烦恼测量是通过顺序采集三个通道来完成的:
- 给体通道:给体激发和给体发射
- 烦恼通道:施主激发，受主发射
- 受体通道:受体激发和受体发射
施主和受主通道被用来消除串扰烦恼通道。烦恼因此，样品制备必须包括没有受体时的给体(仅给体对照)和没有给体时的受体(仅受体对照)。理想情况下，所有的参考文献都包含在相同的准备中。施主和受主参考文献被用来获得校准系数来校正激发和发射串扰。
由于这种方法是非侵入性的，最常用于活细胞实验。
重要的是，在整个实验和校准过程中，所有的测量参数，如相机曝光时间，增益，激发强度必须保持恒定。