介绍
挑战
对于这个肌肉适应研究,有一个可以快速筛选细胞培养标本的成像溶液是很重要的。它还要求图像质量高,以便能够清晰地分辨标记DNA损伤的病灶。当成像较厚的标本时,溶液也应该能够在内部较深的点有良好的对比度。宽视野显微镜为用户提供了速度和检测灵敏度,但由于厚样本的失焦面信号,经常会出现失焦模糊或薄雾,显著降低了图像对比度[4].
方法
本研究中,C2C12小鼠成肌细胞[3],检查肌纤维的前体,被检查。将细胞生长并迁移到Transwell膜的两侧上,并用Lamin B(洋红色)染色以标记核结构,Hoechst(蓝色)标记为DNA,以及Yh2ax(黄色)表示DNA损伤。通过计数焦点评估通过小收缩孔隙3D迁移后细胞损伤。使用a获取细胞的荧光图像THUNDER成像仪活细胞63X/1.4 NA(数值孔径)油浸物镜。大容量计算清理(LVCC),由即时计算清理(ICC)和自适应决策掩码反卷积组成[4],被施用于去除雾度。
结果
下图显示了C2C12细胞。这些图像代表了17.47 μm厚的z堆的场投影深度。
结论
结果表明,在常规的宽视场荧光显微镜下,图像呈模糊状态。然而,在应用THUNDER大容量计算清理后[4]时,对比度明显增强。与传统的宽视场显微镜相比,THUNDER成像仪可以更容易地自动定量和计数焦点。
参考
- L.R. Smith, E.R. Barton,肌肉萎缩症纤维化的调节,基质生物学(2018)vol. 68-69, pp. 602-615, DOI: 10.1016/j.matbio.2018.01.014。
- L.R. Smith, H.G. Chambers, S. Subramaniam, R.L. Lieber,脑瘫儿童腘筋肌挛缩的转录异常,PLOS ONE(2012)第7卷,iss。8、e40686, DOI: 10.1371/期刊。
- L.R.史密斯,S. Cho,D.E.蔑视,干细胞分化由细胞外基质力学,生理学(2018)卷。33,ISS。1,pp。16-25,DOI:10.1152 / physiol.00026.2017。
- 注:THUNDER成像仪:它们到底是如何工作的?科学实验室(2019)徕卡微系统公司。188金宝搏的网址