由于该方法是非侵入性的,因此最常用于实时细胞实验。由于串扰是一个重要的问题,因此控制和复杂的校正计算是该方法固有的。测量是通过检测供体的荧光信号和烦恼以及按线顺序扫描采集中的受体。
适当的激发条件起着主要作用。在第一个序列中,必须兴奋地产生供体荧光并敏化受体的发射。在第二个序列中,对受体的选择性激发将产生受体荧光。
烦恼因此,在没有受体(仅捐赠者对照)的情况下,样本制剂必须包括捐赠者的参考和在没有捐助者(仅受体控制)的情况下受体的参考。
理想情况下,所有参考都包含在同一准备中。供体和受体参考用于获取校准系数以纠正激发和发射横断面。
重要的是要意识到,在整个实验和校准程序中,所有测量参数,例如增益,发射检测窗口,激发强度,变焦,格式,格式,扫描速度,针孔等都必须保持恒定。